德特里克堡生物實(shí)驗(yàn)室位于馬里蘭州弗雷德里克，也是最近常常被媒體曝光的實(shí)驗(yàn)室。但是你可知道，這些實(shí)驗(yàn)室試劑，在你的實(shí)驗(yàn)中也會常見哦。

一、DMSO（二甲基亞砜）

DMSO 起初是木材加工業(yè)的副產(chǎn)品，但從那時(shí)起已成為一種廣泛使用的有機(jī)溶劑。在實(shí)驗(yàn)室中，它可以在許多地方找到，例如 PCR 混合物的一部分，它有助于展開 DNA 和引物的二級結(jié)構(gòu)。它的作用是促進(jìn)引物的退火和通過聚合酶的延伸。以同樣的方式，可以將 DMSO 添加到逆轉(zhuǎn)錄混合物中以幫助展開 RNA 結(jié)構(gòu)。在核酸實(shí)驗(yàn)中，有時(shí)也會用甜菜堿來替代。

另一方面，DMSO 也用于細(xì)胞培養(yǎng)，在細(xì)胞凍存過程中常常作為冷凍細(xì)胞的保護(hù)劑被使用。這只是意味著 DMSO 將在冷凍過程中保護(hù)細(xì)胞。主要作用原理是：當(dāng)細(xì)胞處于冷凍條件下，細(xì)胞內(nèi)的水會凍結(jié)并形成冰晶，這些晶體不僅有可能傷害細(xì)胞，而且凍結(jié)形式的水比液態(tài)水占用更多的空間，這意味著細(xì)胞內(nèi)的冷凍水會膨脹并最終使細(xì)胞爆炸。所以在細(xì)胞低溫凍存時(shí)，適量加入DMSO（或甘油）等冷凍保護(hù)劑來預(yù)防。這些冷凍保護(hù)劑將滲透于細(xì)胞中并置換水，從而保護(hù)細(xì)胞免受凍傷。

DMSO使用過程中需要注意它很容易滲入您的皮膚。因?yàn)镈MSO ,具有一定的血管毒性和肝腎毒性，雖然毒性不強(qiáng)，但使用時(shí)需要帶好手套。如果希望某種藥物滲透到細(xì)胞中時(shí)，可以適宜DMSO，在部分外用藥或化妝品中也會添加微量的DMSO以增強(qiáng)皮膚的滲透性。

二、DTT（二硫蘇糖醇）

William Wallace Cleland作為描述 DTT 減少蛋白質(zhì)中二硫鍵的潛力的人，對該試劑的發(fā)現(xiàn)有較大貢獻(xiàn)，所以 DTT 也被稱為 Cleland 試劑。DTT的作用機(jī)理：許多蛋白質(zhì)（甚至 DNA）具有游離（未結(jié)合）巰基 (-SH) 基團(tuán)，這些未結(jié)合的基團(tuán)傾向于與其他未結(jié)合的-SH 基團(tuán)相互作用，從而導(dǎo)致聚集體的形成。簡而言之，您的蛋白質(zhì)會結(jié)塊并變得不活躍。

DTT 的主要作用在于可以將與蛋白質(zhì)的游離 -SH 基團(tuán)相互作用，從而防止它與其他蛋白質(zhì)相互結(jié)合。從而使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定并保持活性構(gòu)象。它的副作用主要在于它需要PH= 7 或 pH 值大于7才能起作用，并且它在空氣存在下容易氧化（因此將其保存在冰箱的密封瓶中）。DTT 的替代品包括β-巰基乙醇；但是，它的還原力只有DTT的一半，而且氣味難聞。還有一種DTT的替代品是TCEP（三（2-羧基）膦），它沒有氣味，與 DTT 一樣強(qiáng)大，即使在 pH 值低于 7 時(shí)也能保持功能。

三、EDTA（乙二胺四乙酸）

EDTA 是一種所謂的螯合劑。在有機(jī)化學(xué)中，我們知道螯合物有一種與金屬離子結(jié)合的特殊方式。在實(shí)驗(yàn)室試劑中，金屬離子對生物學(xué)家也很重要，因?yàn)樵S多酶如 DNases 和 RNases 需要金屬離子（例如鎂）才能發(fā)揮作用。如果將 EDTA 添加到反應(yīng)混合物中，則會耗盡其中的 Mg 2+，從而有效防止這些RNA酶污染核酸樣本。 盡管 EDTA 實(shí)用，但它也有缺點(diǎn)。因?yàn)?Mg 2+不僅需要平均 DNase 和 RNase，還需要特殊的酶，例如連接酶、聚合酶或核酸內(nèi)切酶。因此，如果您在 DNA 提取中使用 EDTA，您可能會遇到下游反應(yīng)問題，例如連接、PCR 或限制性消化等。

四、糖原（ glycogen）

與這里命名的其他物質(zhì)不同，糖原沒有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室是因?yàn)樗幕瘜W(xué)反應(yīng)性，而是因?yàn)樗狈Ψ磻?yīng)性（它是惰性的）。實(shí)際上，它也不是化學(xué)物質(zhì)，而是一種多糖，由許多動物（包括人類）和真菌自然產(chǎn)生。在我們體內(nèi)，糖原儲存在肝臟和肌肉中，它可以轉(zhuǎn)化為葡萄糖以提供能量。那么如果它是惰性的，它在實(shí)驗(yàn)室里做什么呢？

通常將糖原添加到乙醇沉淀中以提高回收率。由于它沒有化學(xué)活性，因此不會抑制任何下游反應(yīng)。然而，它會捕獲核酸并與它們形成沉淀。這將為您提供更明顯的沉淀，并幫助您回收甚至少量的 DNA 或 RNA。

雖然糖原沒有化學(xué)活性，但它可能會干擾蛋白質(zhì)-核酸相互作用。在這種情況下，可能切換到另一個(gè)惰性載體作為替代品。比如可以使用酵母 tRNA或超聲處理的 DNA代替糖原，它們的市場價(jià)格也相對便宜，但它們具有生物活性，因此可能會在下游反應(yīng)中引起問題。如果有條件也可以選擇無干擾的線性（聚）丙烯酰胺作為替代。

五、PMSF（苯甲基磺酰氟）

在蛋白質(zhì)提取方案中，您經(jīng)常會發(fā)現(xiàn) PMSF。它通過與胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和凝血酶等蛋白酶的活性位點(diǎn)絲氨酸殘基特異性結(jié)合來抑制絲氨酸蛋白酶，從而抑制它們的功能。它還可以阻斷乙酰膽堿酯酶和硫醇蛋白酶，如木瓜蛋白酶。

PMSF 在水中不穩(wěn)定，因此應(yīng)使用無水液體（例如乙醇、異丙醇或 DMSO）制備儲備溶液。 PMSF普遍被認(rèn)為是具有較強(qiáng)毒性的，它會 PMSF 抑制您體內(nèi)的蛋白酶，所以在處理它時(shí)要小心。

六、洗滌劑

去污劑通常用于溶解疏水性蛋白質(zhì)或分解細(xì)胞膜等脂質(zhì)雙層。離子去污劑的頭部帶有凈電荷，所以去污效果明顯，但它們會使接觸到的蛋白質(zhì)發(fā)生變性。

非離子洗滌劑的頭部沒有凈電荷，也相對溫和。所以在蛋白質(zhì)提取通常會選用非離子洗滌劑因?yàn)樗鼈?/span>雖然會破壞細(xì)胞膜，但不會使提取的蛋白質(zhì)變性。

SDS（十二烷基硫酸鈉）作為一種離子洗滌劑。它可以裂解細(xì)胞，較常用于電泳。它會使蛋白質(zhì)變性并包裹蛋白質(zhì)。SDS 的負(fù)電荷比蛋白質(zhì)的任何潛在電荷都要強(qiáng)得多，所以蛋白質(zhì)在SDS凝膠電泳過程中都會向正極遷移。

非離子去污劑的常見的主要有NP40、Triton X-100或Brij 35等。它們都可用于裂解細(xì)胞而不會使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)變性。另一種廣泛使用的非離子去污劑是吐溫 20（TWEN- 20）。它通常用于蛋白質(zhì)印跡，防止抗體的非特異性結(jié)合。

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