RNA提取和DNA提取 實(shí)驗(yàn)在分子生物學(xué)中比較常用，但有時(shí)會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)量低、純度低、易降解等情況，下面就實(shí)驗(yàn)中常見問題及實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)做以匯總：

一、RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)中常見問題

1.產(chǎn)量低

如果您遇到的 DNA/RNA 產(chǎn)量低于您對(duì)樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個(gè)裂解問題。不完全裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100% 200 標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的 DNA 或 RNA 。

2.低純度

如果提取的 DNA 被蛋白質(zhì)污染（低 260/280），那么您可能開始時(shí)樣品過多，而蛋白質(zhì)沒有完全去除或溶解。

如果 DNA 的 260/230 比率不佳，則問題通常是結(jié)合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質(zhì)量的乙醇來制備洗滌緩沖液，如果問題仍然存在，請(qǐng)?jiān)俅蜗礈焐V柱。

與其他樣品相比，一些樣品含有更多的抑制劑。環(huán)境樣品特別容易出現(xiàn)純度問題，因?yàn)楦迟|(zhì)在提取過程中會(huì)被溶解。

腐殖質(zhì)的行為與 DNA 相似，很難從硅膠柱中去除。

3.降解

降解問題是RNA制備中常常到的問題。因?yàn)樵?RNA 提取過程中，樣品儲(chǔ)存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會(huì)導(dǎo)致降解。 對(duì)于 DNA 提取，降解不是一個(gè)大問題，因?yàn)閷?duì)于 PCR，DNA 可以被剪切并且工作正常，如果 不希望有較多剪切的 DNA，可以使用弱裂解的方法。

二、PCR 清理時(shí)的注意事項(xiàng)

PCR 凈化其實(shí)并不是 DNA 提取技術(shù)本身，但它是一種效率高且簡單的技術(shù)，它只是添加高濃度的結(jié)合鹽（通常每體積 PCR 反應(yīng) 3-5 體積鹽）和離心來過濾。

在實(shí)驗(yàn)過程中，PCR Clean-up 試劑盒出現(xiàn)故障也會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)功虧一簣。

因?yàn)樵赑CR 反應(yīng)中有較多吸收 260 度紫外線的物質(zhì)，比如：核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以，PCR 凈化試劑盒經(jīng)常無法正常工作可能是由于 PCR 反應(yīng)失敗所造一般成較難清理。

蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司13年來，致力于生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備及耗材供應(yīng)。其中分子生物學(xué)產(chǎn)品，主要產(chǎn)品包括PCR儀、PCR 清潔試劑盒、天根試劑盒、DNA提取試劑盒、質(zhì)粒提取等上百種實(shí)驗(yàn)耗材，如果了解更多的PCR試劑盒及PCR 實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容可致電0512-62956104/18934597460進(jìn)行咨詢。

蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司成立于2008年，位于蘇州園區(qū)生物納米園（Biobay）A5幢301室。公司管理團(tuán)隊(duì)專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)與完善的售后服務(wù)體系，目前已為300余家實(shí)驗(yàn)室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)，涵蓋各大高校、檢測中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個(gè)群體。提供的實(shí)驗(yàn)室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀，瑞寧移液器，生物反應(yīng)器，發(fā)酵罐，超低溫冰箱，液氮罐，高壓滅菌器，超純水機(jī)，天平，離心機(jī)，離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱，梅特勒，樂楓，搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個(gè)余廠家。