SH-SY5Y細(xì)胞是神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中常用的模型系統(tǒng)，廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)和神經(jīng)藥理學(xué)研究。轉(zhuǎn)染SH-SY5Y 細(xì)胞是一項重要的實驗技術(shù)，在基因功能研究、蛋白表達(dá)和定量分析等方面扮演著關(guān)鍵角色。然而，由于SH-SY5Y細(xì)胞的特殊性質(zhì)，使用傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法可能會遇到一些困難。因此，本文將介紹一種優(yōu)化的SH-SY5Y 細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，并詳細(xì)描述每個步驟。

材料與試劑:

- SH-SY5Y細(xì)胞系：可從Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences或其他來源獲得。

- 細(xì)胞培養(yǎng)基：Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）/F12混合培養(yǎng)基。

- 熱穩(wěn)定型胰酶：用于細(xì)胞的傳代與分離。

- 轉(zhuǎn)染試劑：例如，聚乙烯亞胺（PEI）、脂質(zhì)體等。

- 目標(biāo)基因的質(zhì)粒DNA或siRNA：用于轉(zhuǎn)染和表達(dá)。

- Opti-MEM：用于稀釋轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒。

優(yōu)化方法:

一、準(zhǔn)備SH-SY5Y細(xì)胞

1. 獲得SH-SY5Y細(xì)胞系并進(jìn)行培養(yǎng)。

2. 在T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中分別加入10 ml完整的DMEM/F12培養(yǎng)基及10%胎牛血清（FBS）。

3. 將SH-SY5Y細(xì)胞從細(xì)胞凍存管中復(fù)蘇，并將細(xì)胞傳遞至培養(yǎng)瓶中。

4. 在37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，直至細(xì)胞達(dá)到80-90%的密度。

二、轉(zhuǎn)染前的預(yù)處理

1. 轉(zhuǎn)染前用DMEM/F12培養(yǎng)基含10% FBS對SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理。

2. 將細(xì)胞培養(yǎng)至80-90%的密度。

3. 用1X PBS洗滌細(xì)胞2次，去除細(xì)胞內(nèi)的殘留培養(yǎng)基。

三、轉(zhuǎn)染操作

1. 根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑的使用說明，將轉(zhuǎn)染試劑稀釋至合適的濃度，如使用PEI轉(zhuǎn)染，可在Opti-MEM中稀釋PEI至最終濃度。

2. 在另一個離心管中將質(zhì)粒DNA或siRNA按照使用的量稀釋至合適體積，并在Opti-MEM中混合均勻。

四、轉(zhuǎn)染操作步驟

1. 向細(xì)胞中加入預(yù)先稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑，注意不要形成氣泡并避免細(xì)胞過度干擾。

2. 輕輕震蕩培養(yǎng)瓶，使轉(zhuǎn)染試劑均勻分布。

3. 將稀釋好的質(zhì)粒DNA或siRNA加入到培養(yǎng)基中，與轉(zhuǎn)染試劑充分混合，避免形成沉淀。

4. 震蕩培養(yǎng)瓶并置于37℃的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 根據(jù)研究需求，在48-72小時后進(jìn)行下一步實驗（如蛋白表達(dá)、基因敲除等）。

本文詳細(xì)介紹了一種優(yōu)化的SH-SY5Y細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法。通過合適的細(xì)胞預(yù)處理步驟，并使用適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒DNA/siRNA濃度，可以實現(xiàn)高效且可重復(fù)的SH-SY5Y細(xì)胞轉(zhuǎn)染。值得指出的是，轉(zhuǎn)染條件可能因具體實驗?zāi)康亩杂胁煌?，因此每位研究者都?yīng)根據(jù)實驗需求進(jìn)行適當(dāng)?shù)膬?yōu)化。這種優(yōu)化后的轉(zhuǎn)染方法將有助于更好地理解SH-SY5Y細(xì)胞中的基因功能并推動神經(jīng)科學(xué)研究的發(fā)展。

蘇州阿爾法實驗器材有限公司致力于生物實驗室儀器設(shè)備，實驗耗材，實驗試劑的供應(yīng)服務(wù)14年以上，累計服務(wù)1000多個客戶。

我們主要經(jīng)營的實驗室儀器類產(chǎn)品包括多種類型的實驗室培養(yǎng)箱，如CO2培養(yǎng)箱、CO2搖床、全溫振蕩培養(yǎng)箱、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、BOD培養(yǎng)箱、低溫培養(yǎng)箱等。此外，我們還提供移液器、生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐、液氮罐、超純水機(jī)、天平、高速離心機(jī)、臺式離心機(jī)、迷你離心機(jī)、研磨機(jī)、組織研磨儀、低溫高速離心機(jī)潔凈工作臺等實驗室設(shè)備。

多能干細(xì)胞，成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基,骨髓干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胎牛血清、腫瘤細(xì)胞等細(xì)胞株、細(xì)胞系、SH-SY5Y細(xì)胞  細(xì)胞培養(yǎng)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)耗材、實驗室消毒劑等上千款產(chǎn)品，品類豐富齊全，可根據(jù)您的需求，提供樣機(jī)體驗性能服務(wù)。我們與80余家廠商企業(yè)合作，其中包括知楚儀器、朗基、中科美菱、梅特勒、樂楓、搏旅、NEST、天根、奧盛等。

若您需要進(jìn)一步了解細(xì)胞實驗室儀器設(shè)備相關(guān)信息，0512-62956104或18934597460進(jìn)行咨詢。

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司成立于2008年，位于蘇州園區(qū)生物納米園（Biobay）A5幢301室。公司管理團(tuán)隊專注于科學(xué)儀器行業(yè)十四年，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊與完善的售后服務(wù)體系，目前已為300余家實驗室提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)，涵蓋各大高校、檢測中心、科研機(jī)構(gòu)、制藥企業(yè)等13個群體。提供的實驗室儀器主要包括振蕩培養(yǎng)箱，恒溫恒濕培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、PCR儀，瑞寧移液器，生物反應(yīng)器，發(fā)酵罐，超低溫冰箱，液氮罐，高壓滅菌器，超純水機(jī)，天平，離心機(jī)，離心濃縮儀、研磨機(jī)、葡萄糖乳酸分析儀等。廠商企業(yè)授權(quán)包括知楚儀器、朗基、中科美菱，梅特勒，樂楓，搏旅、NEST、天根、奧盛在內(nèi)的80個余廠家。