生物制藥的生產(chǎn)過(guò)程中，雜質(zhì)產(chǎn)生是不可避免的。這些雜質(zhì)包括宿主細(xì)胞來(lái)源的核酸、宿主細(xì)胞蛋白和潛在的病毒，以及工藝中的溶出析出物等。這些雜質(zhì)會(huì)對(duì)制品的質(zhì)量和安全性產(chǎn)生負(fù)面影響，因此需要在后續(xù)的純化過(guò)程中進(jìn)行去除。本文將介紹驗(yàn)證這些雜質(zhì)去除的方法以及一些實(shí)現(xiàn)過(guò)程中的技術(shù)挑戰(zhàn)。

  宿主細(xì)胞蛋白是一種常見(jiàn)的雜質(zhì)，可能引起制品的嚴(yán)重免疫反應(yīng)。為了去除這些雜質(zhì)，可以使用SDS-PAGE、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法和高效液相色譜（HPLC）等技術(shù)。其中，ELISA是目前用于活性藥物成分放行檢測(cè)以及中間體樣品檢測(cè)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。然而，ELISA的靈敏度通常受到限制。因此，使用縮小模型進(jìn)行的放射性標(biāo)記研究方法可以用于確定HCP去除的能力。這種方法需要制備代表性的放射性標(biāo)記的HCP樣品，使用125I標(biāo)記實(shí)現(xiàn)。挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)可以在單個(gè)的層析步驟上或順序執(zhí)行的單元操作上進(jìn)行。使用縮小模型的挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)也通常用于驗(yàn)證異染色質(zhì)達(dá)標(biāo)性的去除。

  另一個(gè)重要的雜質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。這些添加劑會(huì)提高表達(dá)水平或維持細(xì)胞系的穩(wěn)定性，但對(duì)人體可能具有潛在的毒性、生物活性或免疫源性。因此，在純化過(guò)程中需要證明它們的清除率。例如，甲氨蝶呤、抗生素和生長(zhǎng)因子等成分，經(jīng)放射性標(biāo)記后使用縮小模型進(jìn)行挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)來(lái)證明各個(gè)步驟的清除率。根據(jù)添加到細(xì)胞培養(yǎng)液中的起始量和清除率，可以估算出活性藥物成分中的這些組分的含量，并進(jìn)行安全性評(píng)估。

  來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)品需要證明純化工藝具有去除病毒的能力。病毒的去除驗(yàn)證需要在縮小模型上進(jìn)行，類(lèi)似于用于HCP和DNA去除的驗(yàn)證。選擇一組模式病毒進(jìn)行挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)。這些模式病毒要反應(yīng)不同大小和形狀的范圍，并包括114 DNA和RNA病毒和/或包膜或非包膜病毒家族。基于細(xì)胞培養(yǎng)物中的RVLP的數(shù)量，純化過(guò)程中病毒效價(jià)的總體降低要比起始材料中可能存在的水平高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。

  純化工藝也會(huì)產(chǎn)生一些自身的雜質(zhì)，包括層析柱脫落的配基，比如蛋白A配基。必須證明純化工藝中蛋白A能夠去除到很低并且水平穩(wěn)定。另外，純化過(guò)程中還會(huì)產(chǎn)生內(nèi)毒素等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)是衍生自細(xì)菌（比如大腸桿菌）的脂多糖成分。它們也有可能通過(guò)受污染的原材料引入。因此，需要使用縮小模型進(jìn)行雜質(zhì)去除驗(yàn)證研究。

  在實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)去除過(guò)程中，還需要克服許多技術(shù)挑戰(zhàn)。例如，ELISA方法的靈敏度限制、縮小模型標(biāo)記問(wèn)題、足夠代表性縮小模型構(gòu)建、診斷的選擇以及去除方案的制定等。此外，在縮小模型中挑戰(zhàn)性實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和驗(yàn)證等也是關(guān)鍵。

  總之，在生物制藥的生產(chǎn)過(guò)程中，驗(yàn)證雜質(zhì)去除的能力非常關(guān)鍵，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)對(duì)制品的安全性和質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響。通過(guò)選擇合適的驗(yàn)證方法和克服實(shí)現(xiàn)過(guò)程中的技術(shù)挑戰(zhàn)，可以保證最終的制品符合監(jiān)管要求，并確保制品的安全和品質(zhì)。

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