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Cas9基因敲除細胞系服務(wù)

通過優(yōu)化，Cas9X在細胞系基因敲除的效率是傳統(tǒng)質(zhì)粒法的數(shù)倍（3-5倍）結(jié)合ClonePlus技術(shù)，可以將效率提升10-15倍，也可以針對很多之前難以實現(xiàn)敲除的細胞株進行基因敲除操作，而且周期比病毒法更短。最快可以5周內(nèi)拿到基因敲除的細胞！

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Cas9基因敲除細胞系服務(wù)

Cas9-Cell Line Gene Knock-Out service（CGKO）基因敲除細胞系服務(wù)是針對各種常用的細胞系，進行基因片段敲除的技術(shù)服務(wù)。

主要提供：Cas9介導(dǎo)的大片段基因敲除（非移碼）的方式導(dǎo)致細胞基因功能缺失，基因敲除可以將基因功能完全消除，比RNA干擾獲得的數(shù)據(jù)更加確定，沒有RNA干擾殘留的基因功能背景的干擾，目前越來越成為主流的基因功能研究方式。使用Cas9X可以讓你輕松靶向更高分的文章！

使用Cas9的進行細胞系基因敲除的過程中發(fā)現(xiàn)：不同的位點不同的細胞系的效率差異很大，原因包括：不同的細胞株的基因拷貝數(shù)的差異很大（很多細胞系并非二倍體，而是混雜的多倍體），很多細胞的基因存在基因切割位點突變的問題（導(dǎo)致按照生物基因庫設(shè)計的gRNA無法發(fā)揮作用），還有細胞無法獲得單克隆，這些都是目前進行基因敲除的困難所在。

CS9技術(shù)流程

| Cas9X使用新的實驗?zāi)Ｐ蛯⒓毎档那贸蔬M行大幅的提升

1. 使用Cas9蛋白和gRNA的復(fù)合物直接進行電轉(zhuǎn)，提高效率的同時減少非特異的切割；（目前報道脫靶率最低的方法）
2. 使用高效的電轉(zhuǎn)設(shè)備，具備更高的電轉(zhuǎn)效率和細胞存活率；
3. 使用更先進的單克隆稀釋設(shè)備和方法，大幅提高陽性率；（提高2倍）
4. 持續(xù)建庫：我們也將提供更多的標(biāo)準(zhǔn)細胞株和基因編輯細胞株產(chǎn)品供科研工作者選擇。
5. 大片段敲除，可以通過PCR快速鑒定；
6. 非移碼方式敲除，可以保證細胞系做基因回補無需考慮突變修飾的問題。

CS9基因編輯

通過優(yōu)化，Cas9X在細胞系基因敲除的效率是傳統(tǒng)質(zhì)粒法的數(shù)倍（3-5倍）結(jié)合 ClonePlus技術(shù)，可以將效率提升10-15倍，也可以針對很多之前難以實現(xiàn)敲除的細胞株進行基因敲除操作，而且周期比病毒法更短?？梢?周內(nèi)拿到基因敲除的細胞！
| Cas9基因敲除細胞系技術(shù)原理圖

CAS9技術(shù)原理

| 細胞工作流程

細胞工作流程

我們還能為您提供：

基因敲除細胞系服務(wù)
基因點突變細胞系服務(wù)
基因定點敲入細胞系服務(wù)
微生物基因編輯服務(wù)
基因敲除Cell Pool服務(wù)

客戶案例

項目名稱

構(gòu)建MARVELD1基因敲除的人鼻咽癌細胞C666-1

實驗設(shè)計
種屬：Human；基因名稱：MARVELD1
gRNA位點1：ATACGCTACCTAACATGGCTGGG
gRNA位點2：CCAGCATGCAAAATACAATGGGG

策略圖

細胞信息
種屬：Human
細胞名稱：人鼻咽癌細胞C666-1
培養(yǎng)基：DMEM，10%FBS

細胞檢測
無菌檢測：合格；支原體檢測：合格
細胞克隆形成率檢測：細胞增殖能力較好，但克隆團較小。
細胞基因型檢測：針對gRNA打靶位置及其附近基因組序列進行測序。測序結(jié)果與理論序列一致。

細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)
電轉(zhuǎn)參數(shù)：1350V,20ms,1次；電轉(zhuǎn)體系：10 uL

PCR篩選
篩選克隆數(shù)量：170；雜合子數(shù)量：13；純合子數(shù)量：2

電泳圖示例
WT：490 bp；雜合子：490 bp；純合子：0 bp

電泳圖

測序結(jié)果

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