天天ri网,日本免费高清线视频免费久久

您的位置： 首頁 > 產(chǎn)品頻道 > 基因編輯-細(xì)胞服務(wù)類產(chǎn)品 > Cas9基因點(diǎn)突變技術(shù)服務(wù)

Cas9基因點(diǎn)突變技術(shù)服務(wù)

Cas9基因點(diǎn)突變技術(shù)服務(wù)針對(duì)不同單堿基突變的情況使用不同的Mutation載體策略：包括短同源臂可以使用Oligo引入突變，需要長同源臂的使用ssDNA引入突變。而針對(duì)難以操作的細(xì)胞系，將需要通過先構(gòu)建Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株再進(jìn)行g(shù)RNA和載體共轉(zhuǎn)染來提高效率。Cas9X針對(duì)每個(gè)具體的位點(diǎn)、每個(gè)具體的細(xì)胞優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件用來滿足不同細(xì)胞系和不同位點(diǎn)突變的服務(wù)需求。

在線咨詢

全國熱線

0512-62956104

Cas9基因點(diǎn)突變 技術(shù)服務(wù)

Cas9-Cell line Gene Mutation service（CGM）基因點(diǎn)突變細(xì)胞系是細(xì)胞基因研究方法中一個(gè)重要手段，它可以在細(xì)胞內(nèi)原位對(duì)點(diǎn)突變的功能進(jìn)行研究。在細(xì)胞系上實(shí)現(xiàn)高效的轉(zhuǎn)染是實(shí)現(xiàn)基因點(diǎn)突變的前提；提高效率要解決問題是：Cas9切割位點(diǎn)與“點(diǎn)突變”位點(diǎn)之間距離導(dǎo)致點(diǎn)“點(diǎn)突變”效率大幅下降的問題，還有“點(diǎn)突變”載體的選擇問題。

目前 Cas9基因點(diǎn)突變 技術(shù)服務(wù)使用Cas9的引入基因“點(diǎn)突變”的具體實(shí)驗(yàn)實(shí)踐中的“單堿基突變”的效率仍然受到很多要素的影響，例如是否在點(diǎn)突變附近是否存在有合適的gRNA切割位點(diǎn)、切割位點(diǎn)和突變位置之間距離、不同細(xì)胞系之間的Cas9切割活性效率差異的問題、還有細(xì)胞株是否存在“假基因”和基因“多拷貝”的問題導(dǎo)致無法獲得純合的問題等等。

Cas9基因點(diǎn)突變 技術(shù)服務(wù)針對(duì)不同單堿基突變的情況使用不同的Mutation載體策略：包括短同源臂可以使用Oligo引入突變，需要長同源臂的使用ssDNA引入突變。而針對(duì)難以操作的細(xì)胞系，將需要通過先構(gòu)建Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株再進(jìn)行g(shù)RNA和載體共轉(zhuǎn)染來提高效率。Cas9X針對(duì)每個(gè)具體的位點(diǎn)、每個(gè)具體的細(xì)胞優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件用來滿足不同細(xì)胞系和不同位點(diǎn)突變的服務(wù)需求。

Cas9 基因點(diǎn)突變 技術(shù)原理

基因點(diǎn)突變技術(shù)原理

Cas9基因點(diǎn)突變 技術(shù)流程

CS9技術(shù)流程

我們還能為您提供：

基因敲除細(xì)胞系服務(wù)
基因點(diǎn)突變細(xì)胞系服務(wù)
基因定點(diǎn)敲入細(xì)胞系服務(wù)
微生物基因編輯服務(wù)
基因敲除Cell Pool服務(wù)

客戶案例

| 項(xiàng)目名稱：

構(gòu)建Ret 基因點(diǎn)突變(E623K)的小鼠胚胎干細(xì)胞
| 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：
種屬：Mouse；基因名稱：Ret 突變信息：E623K（GAG to AAG）

WT序列：
gccagggcattaaagcaggctacggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcGAGCCAGAGga
cagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacctcccctaaccctcaagggagtt
gRNA位點(diǎn)序列：GAAATGCTTCTGCGAGCCAGAGG

oligo序列：
ggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcAAGCCAGAAgacagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacc

MT序列：
gccagggcattaaagcaggctacggcatctgcaactgtttccctgatgagaagaaatgcttctgcAAGCCAGAAga
cagccagggtaagtcatgcctcccacacagttccccaacctcccctaaccctcaagggagtt

備注：在E623K（GAG to AAG）基礎(chǔ)上，引入同義突變E625E (GAG to GAA)防止發(fā)生gRNA位點(diǎn)被再次切割。

策略圖：

基因點(diǎn)突變技術(shù)原理

細(xì)胞信息
種屬：Mouse；細(xì)胞名稱：胚胎干細(xì)胞

細(xì)胞檢測
無菌檢測：合格；支原體檢測：合格
細(xì)胞克隆形成率檢測：細(xì)胞增殖能力較好，克隆形成率較好。
細(xì)胞基因型檢測：針對(duì)gRNA打靶位置及其附近基因組序列進(jìn)行測序, 測序結(jié)果與理論序列一致。

細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)
電轉(zhuǎn)參數(shù)：1400V, 20ms, 1次；電轉(zhuǎn)體系：10 uL

PCR篩選
篩選克隆數(shù)量：185；雜合子數(shù)量：19；純合子數(shù)量：3

: 尊敬的訪客：

當(dāng)您來到這個(gè)頁面時(shí)，您已成為我們最尊貴的客戶，蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司真誠歡迎您的到來！

: 聯(lián)系我們
免費(fèi)服務(wù)電話：18934597460
0512-62956104
十四年專注于生物實(shí)驗(yàn)室儀器供應(yīng)

熱品推薦 / Hot product

: Solentim MatriClone? iPSC基質(zhì)膠-單細(xì)胞克隆和生長促進(jìn)劑

SolentimMatriClone?iPSC基質(zhì)膠-單細(xì)胞克隆和生長促進(jìn)劑是一種新型的“無動(dòng)物源”基質(zhì)，旨在支持iPSC的早期生長，并提高單細(xì)胞鋪板中iPSC的生長效率。MatriClone優(yōu)化了“in-solution”鋪板法，使之在光學(xué)上更適合自動(dòng)成像，與VIPS鋪板系統(tǒng)結(jié)合使用，可以提高單細(xì)胞的存活及后續(xù)生長效率，實(shí)現(xiàn)了一種簡單、自動(dòng)化的工作流程。

: LightNing AccI 限制性內(nèi)切酶 ?

LightNigAccI限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品介紹LightNigreg快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。所有LightNigreg快速內(nèi)切酶在通用的CutOereg或CutOeregColorBuffer中都具有優(yōu)良的活性，能夠在5~15分鐘內(nèi)完成酶切。此外，百時(shí)美去磷酸化、連接試劑在CutOeregBu......

: LightNing-快速內(nèi)切酶-AscI酶

LightNing?快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。所有LightNing?快速內(nèi)切酶在通用的CutOne?或CutOne?ColorBuffer中都具有優(yōu)良的活性，能夠在5~15分鐘內(nèi)完成酶切。此外，百時(shí)美去磷酸化、連接試劑在CutOne?Buffer中均具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接”的體驗(yàn)。

: LightNing 快速內(nèi)切酶-agei內(nèi)切酶

LightNing快速內(nèi)切酶-agei內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，專為質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA的快速酶切而設(shè)計(jì)。該系列酶在通用的CutOne?或CutOne?Color緩沖液中具有優(yōu)良的活性，并能在短短的5~15分鐘內(nèi)完成酶切，幫助節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。