QuickShuttle-Hela 轉(zhuǎn)染試劑（Hela 細(xì)胞用）

貨號：KX0110045 

含量：0.8 ml

 用途：用于 Hela 細(xì)胞的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建（立傳立轉(zhuǎn)）。 

QuickShuttle系列轉(zhuǎn)染試劑選擇一覽表
 


產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	產(chǎn)品用途
QuickShuttle-Basic	KX0110041	0.8ml	適用于大多數(shù)哺乳動物貼壁細(xì)胞系，可用于原代細(xì)胞和二倍體細(xì)胞
QuickShuttle-Enhanced	KX0110042	0.8ml	適用于大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞系，專用于難轉(zhuǎn)細(xì)胞系
QuickShuttle-Superfast	KX0110043	0.8ml	細(xì)胞消化和轉(zhuǎn)染同時進(jìn)行，立傳立轉(zhuǎn)?？捎糜趹腋〖?xì)胞
QuickShuttle-293	KX0110044	0.8ml	專用于各種293細(xì)胞，立傳立轉(zhuǎn)
QuickShuttle-Hela	KX0110045	0.8ml	專用于Hela細(xì)胞，立傳立轉(zhuǎn)
QuickShuttle-BHK-21	KX0110046	0.8ml	專用于BHK-21細(xì)胞，立傳立轉(zhuǎn)

注意事項(xiàng)：

 1. 質(zhì)粒 DNA：請用能夠去除內(nèi)毒素的方法制備高質(zhì)量的質(zhì)粒 DNA。

 2. 稀釋液：0.85%（W/V）生理鹽水，用低內(nèi)毒素純水配制，高壓消毒或除菌過濾。

 3. 培養(yǎng)基：經(jīng)過 DMEM、RPMI-1640 和 M199 等常規(guī)培養(yǎng)基測試，推薦使用含 5~10%牛血清的 DMEM，若轉(zhuǎn)染效果不理想可嘗試其它培養(yǎng)基。

 4. 以 24 孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦每孔低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 用量為 1~2μg、轉(zhuǎn)染試劑用量為 3~5μl， 請?jiān)谡綄?shí)驗(yàn)前根據(jù)不同培養(yǎng)基用報告基因進(jìn)行優(yōu)化。 

5. 立傳立轉(zhuǎn)要求使用生長旺盛的細(xì)胞，即細(xì)胞生長至 80-90%成片或剛長滿。若使用生長過老的細(xì)胞， 將明顯影響立傳立轉(zhuǎn)的效率。 

6. 立傳立轉(zhuǎn)對細(xì)胞狀態(tài)要求較高，如果轉(zhuǎn)染效果不理想，可按 QuickShuttle-Enhanced 的轉(zhuǎn)染方法（見本 說明書第 4 頁），在細(xì)胞貼壁后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染操作。 

QuickShuttle系列轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效果圖

使用方法 ：

1. 將新鮮消化的 Hela 細(xì)胞接種到 24 孔細(xì)胞板中，每孔 1~2×105細(xì)胞，1ml 完全培養(yǎng)基。備注：可在生 長旺盛的細(xì)胞傳代后直接按下述步驟 2~5 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，無需 18~24 小時的等候時間。 

2. 將 1~2μg 質(zhì)粒 DNA 和 3~5μl 轉(zhuǎn)染試劑分別稀釋到 50μl 生理鹽水中。備注：質(zhì)粒 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的 最適用量需要根據(jù)不同培養(yǎng)基來優(yōu)化，但理論上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范圍。

3. 合并上述兩溶液并混勻。備注：無需其它轉(zhuǎn)染試劑所需的 10~30 分鐘的等候時間。 

4. 將上述復(fù)合物直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，用加樣器吸打混勻。備注：轉(zhuǎn)染復(fù)合物可直接加入含血清的 細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。 

5. 將細(xì)胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。備注：無需在轉(zhuǎn)染后 4~6 小時補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng) 基。

 6. 24~72 小時后根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行瞬時表達(dá)分析或穩(wěn)定細(xì)胞系加壓篩選。