基因敲除細(xì)胞株-MHCC97H KO-hKLF4

細(xì)胞名稱(chēng)：基因敲除細(xì)胞株- MHCC97H KO-hKLF4

細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng)：MHCC97H KO-hKLF4

產(chǎn)品貨號(hào)：CGKO-M2125

修飾基因：hKLF4

修飾類(lèi)型：敲除

轉(zhuǎn)導(dǎo)方法：質(zhì)粒電轉(zhuǎn)

抗性基因：Puro

克隆類(lèi)型：純合子

細(xì)胞鑒定：PCR，測(cè)序

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：肝

疾病特征： 高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

參考文獻(xiàn)：

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Proteome analysis of hepatocellular carcinoma cell strains, MHCC97-H and MHCC97-L, with different metastasis potentials.

Proteomics 4:982-994(2004)

|   細(xì)胞接收后處理方法

1.運(yùn)輸方式：凍存管（默認(rèn)發(fā)送方式）

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后，先檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無(wú)破損等情況，并核對(duì)細(xì)胞管上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 收到細(xì)胞后如不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，則請(qǐng)將細(xì)胞放至-80℃或液氮中保存。

③ 實(shí)驗(yàn)前開(kāi)啟水浴鍋并預(yù)熱培養(yǎng)基，并備好15mL離心管加入5mL預(yù)熱后的培養(yǎng)基。

④ 將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi)，快速搖動(dòng)解凍直到內(nèi)容物融化，同時(shí)需注意避免水面沒(méi)過(guò)管口。

⑤ 將凍存管外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后，在超凈臺(tái)內(nèi)小心開(kāi)蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。使用1 mL培養(yǎng)基清洗凍存管內(nèi)壁，一并收集至15mL離心管內(nèi)。

⑥ 250g離心5min，收集細(xì)胞沉淀，棄掉上清并加入2mL完全培養(yǎng)基重懸。

⑦ 取20μL細(xì)胞懸液至EP管，臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù)，記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系，如無(wú)臺(tái)盼藍(lán)，可略過(guò)該步驟。

⑧ 將重懸后的細(xì)胞接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

⑨ 24h后鏡下拍照并反饋我們，換液后繼續(xù)培養(yǎng)。

2.運(yùn)輸方式：培養(yǎng)瓶（貼壁細(xì)胞）

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后，先檢查包裝是否完整，有無(wú)破損漏液的情況，并核對(duì)細(xì)胞瓶上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基是否澄清，鏡下觀察細(xì)胞是否狀態(tài)良好，并將細(xì)胞容器外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后，置于培養(yǎng)箱內(nèi)放置2-3h，讓脫壁的細(xì)胞可以重新貼附。

③ 小心開(kāi)蓋移去瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，更換為細(xì)胞專(zhuān)用的完全培養(yǎng)基，按照培養(yǎng)器皿決定用量。若細(xì)胞脫壁過(guò)多，可將原培養(yǎng)基離心獲得細(xì)胞沉淀，再接種回原瓶?jī)?nèi)。

④ 鏡下拍照并反饋我們，如細(xì)胞匯合度較低，則放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。如細(xì)胞匯合度達(dá)到80%以上，則可按照常規(guī)方法進(jìn)行消化傳代。

3.運(yùn)輸方式：培養(yǎng)瓶（懸浮細(xì)胞）

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后，先檢查包裝是否完整，有無(wú)破損漏液的情況，并核對(duì)細(xì)胞瓶上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞瓶數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 觀察瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基是否澄清，鏡下觀察細(xì)胞是否狀態(tài)良好，拍照并反饋我們。

③ 將細(xì)胞容器外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后，置于超凈工作臺(tái)內(nèi)小心開(kāi)蓋。將瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基全部轉(zhuǎn)移至若干50 mL離心管內(nèi)，并清洗培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁一并收集。

④ 250g離心5min收集細(xì)胞沉淀，棄掉上清，使用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸至合適密度。接種至合適的培養(yǎng)器皿中，置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

⑤ 培養(yǎng)24h后觀察細(xì)胞狀態(tài)和密度，按照常規(guī)方法進(jìn)行傳代。

4.運(yùn)輸方式：血清管

① 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后，先檢查包裝是否完整，有無(wú)破損漏液的情況，并核對(duì)細(xì)胞管上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

② 收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如不能及時(shí)處理，請(qǐng)將細(xì)胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24h內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)。否則細(xì)胞狀態(tài)和存活率將會(huì)受到一定的影響。

③ 血清管懸液可能會(huì)呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正常現(xiàn)象，請(qǐng)放心操作。

④ 將血清管外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后，在超凈臺(tái)內(nèi)小心開(kāi)蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi)。

⑤ 吸取1mL 培養(yǎng)基清洗血清管內(nèi)壁，同樣轉(zhuǎn)移至15mL管，并吹打均勻。

⑥ 取20μL細(xì)胞懸液至EP管，臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù)，記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系，如無(wú)臺(tái)盼藍(lán)，可略過(guò)該步驟。

⑦ 250g離心5min，收集細(xì)胞沉淀，并接種至合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

⑧ 24h后鏡下拍照并反饋我們，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。

5.運(yùn)輸方式：“細(xì)胞膠囊”技術(shù)
①  “細(xì)胞膠囊”包括細(xì)胞管和Buffer共2個(gè)試劑管。請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后，先檢查真空包裝袋內(nèi)的“細(xì)胞膠囊”管身是否完好，培養(yǎng)液是否外滲，并核對(duì)管身上的標(biāo)簽信息，細(xì)胞管數(shù)是否與發(fā)貨清單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

②  收到“細(xì)胞膠囊”后請(qǐng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如不能及時(shí)處理，請(qǐng)將細(xì)胞放至常溫環(huán)境，通常15-25℃為佳，并盡量在24 h內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)，否則細(xì)胞狀態(tài)和存活率將會(huì)受到一定的影響?！凹?xì)胞膠囊”管內(nèi)的培養(yǎng)液可能會(huì)呈現(xiàn)一定程度的渾濁狀態(tài)，這屬于正?，F(xiàn)象，請(qǐng)放心操作。

③ 用75%酒精消毒包裝袋表面，在超凈臺(tái)內(nèi)取出細(xì)胞膠囊管和Buffer管，小心的打開(kāi)細(xì)胞膠囊管蓋，盡量避免氣泡溢出。 

④ 使用移液槍將細(xì)胞膠囊管中的培養(yǎng)液全部棄去。

⑤ 將Buffer全部加入到細(xì)胞膠囊管中，擰緊管蓋，上下顛倒3-5 min。

⑥ 觀察到細(xì)胞膠囊完全溶解后，小心開(kāi)蓋，使用移液槍輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移到15 mL離心管內(nèi)。

⑦ 取20μL細(xì)胞懸液至EP管，臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù)，記錄細(xì)胞數(shù)量和存活率。如有異常請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

⑧ 250 g離心4 min，收集細(xì)胞沉淀，并接種到合適大小的培養(yǎng)器皿中，放置于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

⑨ 24 h 后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察細(xì)胞時(shí)請(qǐng)拍100×、200×各2-3張照片進(jìn)行留存，所拍照片應(yīng)盡量清晰，并根據(jù)匯合度繼續(xù)培養(yǎng)或消化傳代。