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蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司

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  • 快速限制性內(nèi)切酶
LightNing AccI內(nèi)切酶-快速限制性內(nèi)切酶
產(chǎn)品貨號： EG15502S
產(chǎn)品規(guī)格： 50 rxns
同裂酶： XmiI, FblI
識別位點(diǎn)： GTMKAC5'...G T ↓ M K A C...3'3'...C A K M ↑ T G...5'
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LightNing AccI內(nèi)切酶-快速限制性內(nèi)切酶

AccI內(nèi)切酶

產(chǎn)品貨號： EG15502S
產(chǎn)品規(guī)格： 50 rxns
同裂酶： XmiI, FblI
識別位點(diǎn)： GTMKAC5'...G T ↓ M K A C...3'3'...C A K M ↑ T G...5'

LightNing AccI內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有 LightNing? 快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne? 或 CutOne? Color Buffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。

LightNing? AccI內(nèi)切酶 組成

組分

規(guī)格

LightNing? AccI

50 μl

10× CutOne? Buffer

1 ml

10× CutOne? Color Buffer

1 ml

特性和用法

LightNing? AccI內(nèi)切酶 ，可在5~15 min內(nèi)完成反應(yīng)
建議反應(yīng)條件


  • 1× CutOne? 緩沖液；
  • 37℃溫育； 參照“DNA  快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。
  • 失活條件: 80℃溫育20 min 。
  • 甲基化敏感性: 對于被 CpG  甲基化的  DNA，剪切可能受阻。
  • 存儲條件: -20℃


相關(guān)問答

Q:為什么在 CutOne? Buffer 中加入HSA ？

A:一些酶在反應(yīng)過程中需要 HSA 的參與，我們在CutOne? Buffer 中添加了 HSA ，避免反應(yīng)中額外添加組分，使得酶切反應(yīng)更加便捷 。

Q:HSA的添加對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能會產(chǎn)生什么樣的影響？

A:在我們的測試中未曾發(fā)現(xiàn) HSA 對于雷霆系列限制性內(nèi)切酶的功能有任何影響。在有些情況下，對于部分的酶切反應(yīng)有促進(jìn)作用。

Q:我需要嚴(yán)格遵守 5~15 min 的酶切時間嗎？能夠延長反應(yīng)時間嗎？

A:雷霆系列限制性內(nèi)切酶經(jīng)過改造可以將酶切時間縮短至 5~15 min 。同樣也消除了限制性內(nèi)切酶的星活性（長時間反應(yīng)造成的非特異性消化），在說明書中告知的星活性出現(xiàn)的時間范圍內(nèi)可以適當(dāng)延長反應(yīng)時間。

Q:我什么時候應(yīng)當(dāng)考慮星活性對于酶切反應(yīng)的影響？

A:如果額外的酶切條帶對于實(shí)驗(yàn)結(jié)果會產(chǎn)生影響時我們應(yīng)當(dāng)考慮星活性對于酶切反應(yīng)的影響。例如：進(jìn)行基因型、突變型分析或克隆時我們應(yīng)當(dāng)避免星活性的產(chǎn)生。避免星活性的有效方法：適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體積（較小的反應(yīng)體積容易造成甘油體積達(dá)到或超過總反應(yīng)體積的 5%）；不進(jìn)行超長時間孵育（過夜消化極易產(chǎn)生星活性）。

Q:有哪些關(guān)鍵因素會導(dǎo)致星活性？

A:長時間孵育、過量的酶、高甘油含量（通常高于 5% ）、較小的反應(yīng)體系等因素都會導(dǎo)致星活性的產(chǎn)生。

Q:未經(jīng)純化的 PCR 產(chǎn)物直接酶切要怎樣設(shè)定體系？

A:反應(yīng)體系推薦由這些內(nèi)容組成： 10  μl PCR 產(chǎn)物、 2  μ l 10 × CutOneTM Buffer 、 1~2  μ l 相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶、 ddH2O 補(bǔ)齊到 30  μ l 。酶的用量根據(jù) PCR產(chǎn)物的濃度而定，只加入 2  μ l 反應(yīng)緩沖液的原因是 PCR 反應(yīng)中存在對應(yīng)的鹽離子和金屬離子，適當(dāng)減少反應(yīng)緩沖液的用量以保證最終反應(yīng)體系中的環(huán)境適宜限制性內(nèi)切酶發(fā)揮功能。


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