天根 KR211 miRcute增強型miRNA DNA合成試劑盒
天根 KR211 miRcute增強型miRNA DNA合成試劑盒采用加A法來進行miRNA cDNA的反轉錄。
本試劑盒采用了雙組分形式，簡化了實驗操作流程，降低了操作失誤的可能性。
試劑盒中的miRNA RT Enzyme Mix包含了E.coli Poly(A) Polymerase、RTase和RNasin，其中的E.coli Poly(A) Polymerase不但具有高*效的加A尾效率，還可特異性識別單鏈 miRNA，避免了具有雙鏈結構的miRNA前體的進一步逆轉錄反應；RTase經(jīng)過分子改造，去掉了RNase H活性，增加了RNA模板親和力，從而使得miRNA的逆轉錄反應具有較高的效率和靈敏度。
試劑盒中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反應和逆轉錄反應的所有原料和引物，并經(jīng)過精心優(yōu)化，可保證miRNA 3'末端的Poly(A)修飾過程和 逆轉錄過程同時高效進行。
1. 省時省力。本試劑盒將miRNA的加A尾反應和逆轉錄反應合二為一，在減少操作步驟的同時也節(jié)省了一半的反應時間。另外，本試劑盒為雙組分形式，操作過程中只需加入RNA模板和兩個組分即可進行miRNA的逆轉錄反應，進一步簡化了操作。
2. 特異性強。本試劑盒中的E.coli Poly(A) Polymerase和RTase都只針對單鏈的miRNA進行修飾和逆轉錄反應，可避免具有二級結構的miRNA前體進行逆轉錄反應。
3. 靈敏度高。本試劑盒通過將加A尾反應和逆轉錄反應的整合，實現(xiàn)了miRNA的加A產(chǎn)物可全部進行進一步的逆轉錄反應，大大提高了低豐度miRNA的檢出率。
4. 適用廣泛。本試劑盒可針對幾乎所有材料提取的miRNA進行逆轉錄反應，模板的使用范圍可達20 pg-2 μg(質量范圍)和10 fM-100 pM (濃度范圍)。
染料法/探針法miRNA的熒光定量研究
本試劑盒須與miRcute Plus miRNA熒光定量檢測試劑盒(FP411)配套使用
圖1. 使用TIANGEN miRcute增強型miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒(KR211)分別與國外知名Q公司(左)和國內(nèi)T公司(右)的同類產(chǎn)品反轉錄人類miRNA mimics mix，之后用熒光定量檢測
hsa-miR-133a-3p。結果顯示，對于同一RNA樣本，與競品(藍色線)相比TIANGEN KR211(紅色線)反轉錄之后得到的cDNA量更大。KR211具有更高的反轉效率。miRNA mimics mix上樣量：2×108 copies；反轉錄體系：20 μl，取2 μl定量；定量試劑：TIANGEN miRcute增強型miRNA熒光定量檢測試劑盒(SYBR Green)(FP411)；使用儀器：ABI 7500 fast。
圖2. 使用TIANGEN miRcute增強型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒(KR211，上排)與國外知名Q公司(下排)的同類產(chǎn)品分別反轉錄人類Total RNA，之后 用熒光定量檢測hsa-miR-122-5p。結果顯示，對于同一RNA樣本，與競品相比TIANGEN KR211具有更高的靈敏度和穩(wěn)定性，更適合下游實驗。Human Huh7細胞Total RNA提取采用TRNzol Universal(DP424)。反轉錄上樣量：100 ng-1 pg；反轉錄體系：20 μl，取2 μl
定量；定量試劑：TIANGEN miRcute增強型miRNA熒光定量檢測試劑盒(SYBR Green)(FP411)；使用儀器：ABI 7500 fast。 
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